Ez egy nagyon érdekes kérdés, és ismét emlékeztet arra, hogy mennyire tudatlanok vagyunk olyan finom dolgokról, mint amilyeneknek egyébként nyilvánvalónak kellett volna lenniük.
Először is, bár úgy tűnik, hogy nincsenek zavarok , Szeretném tisztázni, hogy az elektroforézis során a fehérjét elválasztjuk. A hemoglobinelektroforézis klasszikusan a cellulóz-acetát / citrát agar elektroforézisre utal, ahol mintaként az RBC hemolizátumot használják. Ez a módszer azt a tényt használja, hogy a hemoglobinopátiák általában mutált Hb-vel rendelkeznek, amelyek töltésében különböznek az eredeti HbA-tól. A töltés az elválasztási tulajdonság a cellulóz-acetát elektroforézisben, ellentétben az SDS-PAGE-val, ahol az elválasztás mol alapján történik. wt.
DNS-elektroforézist ( digressing ) is végezhetünk a Hbpathia azonosítására restrikciós enzimekkel történő emésztés után, amely más eredményeket adna, attól függően, hogy milyen restrikciós enzimet használtak különböztesse meg a mutációt az eredetitől. Itt van egy példa az MstII használatával az RFLP-khez. Itt nem erről van szó. A mintánk a fehérje , és nem a DNA.
Ezért fontos, hogy az elektroforézis, amelyről beszélni fogunk, egy fehérje elektroforézis töltésen alapul .
Figyelembe véve a sarlósejt tulajdonságait, tisztázzuk most a terminológiát. A HbA normális hemoglobin-tetramer, amely $ \ \ alpha_2 \ beta_2 ^ A $ -ból áll. A HbS viszont $ \ \ alpha_2 \ beta_2 ^ S $. Az Ön által használt terminológia nemcsak szabványos, hanem más értelmet is közvetít. Most logikus, hogy a sarlósejtes tulajdonságokkal rendelkező személyekben hemoglobint kell várni, mindkét béta-lánccal. És megtörténik! Az irodalom aszimmetrikus hibrid nek nevezi. Jelöljük AH-val, amely $ \ \ alpha_2 \ beta ^ A \ beta ^ S $. Összegezzük ezt egy kicsit.
HbA = $ \ \ alpha_2 \ beta_2 ^ A $
HbS = $ \ \ alpha_2 \ beta_2 ^ S $
AH = $ \ \ alpha_2 \ beta ^ A \ beta ^ S $
Az itt említett aszimmetrikus hibrid csak a sarlósejt-tulajdonságra vonatkozik. Sok más hemoglobinopathia létezik, és heterozigóta állapotukban más aszimmetrikus hibridek is beszerezhetők más béta lánccal.
Most, hogy tudjuk, hogy aszimetrikus hibridek képződnek, miért nem jelennek meg a Hb elektroforézis?
Általában úgy gondolják, hogy fiziológiai körülmények között, egyensúlyi helyzetben a hemoglobin a tetramerok ($ \ \ alfa_2 \ beta_2 $) és a dimerek ($ \ \ alfa \ béta) keveréke. $) as $$ \ \ alpha_2 \ beta_2 ⇌ 2 \ alpha \ beta $$ Az oxihemoglobin disszociációs egyensúlyi állandója körülbelül $ \ 2x10 ^ {- 6} M $ (hem), de a deoxyhemoglobin esetében sokkal kisebb. Az aszimmetrikus hibridet általában nem izolálják hagyományos módszerekkel, mivel a tetramer-dimer disszociációs állandó sokkal alacsonyabb in vitro, mint in vivo. Így az aszimmetrikus hibrid disszociál a $ \ \ alfa \ beta ^ A: \ alfa \ beta ^ S $ dimerekbe, és az elválasztási folyamat során újból szimmetrikusabb formákba asszociálódik. hibridek oxigénmentes körülmények között, például izoelektromos gél fókuszálás, a láncok keresztkötése stb. \ a ^ 2 + 2ab + b ^ 2 $. Ez azt jelenti, hogy az AH stabilitása összehasonlítható a HbA-val és a HbS-szel.
Remélem, hogy ez segített.
A további elmélyüléshez íme néhány hivatkozás, amelyet érdemes használni.
- HF Bunn és M McDonough (1974), Assymetrical Hemoglobin Hybrids. An Approach to the Study of Subun Interactions , Biochemistry, 13 (5) 989-93.
- MK. McCormack, TG. Westbrook, RM. Paull & S Berman (1981), Az emberi oxi-hemoglobinok A aszimmetrikus hibridjének azonosítása
és S (α2βAβS) 4 ° C-on, cellulóz-acetát elektroforézissel , Hemoglobin, 5 (3) 251-56.